简述杂交瘤技术的基本原理

杂交瘤技术一般指B淋巴细胞杂交瘤技术。即免疫脾细胞通过细胞融合技术与同源动物骨髓瘤细胞杂交，通过筛选获得分泌预定特异性抗体的杂交细胞。让我们来介绍一下莱德伯特（北京）生物科技有限公司的杂交瘤技术的基本原理。

1975年，两位学者科勒和米尔斯坦开发了一种基于细胞融合的技术。将体外培养的小鼠骨髓瘤细胞与绵羊红细胞（SRBC）免疫的小鼠脾细胞融合，建立了分泌SRBC单克隆抗体的杂交瘤细胞系。结果表明，这些细胞可以在体外连续培养。它开创了抗体制备和应用的新时代。

杂交瘤技术是一种周期长、连续性强的实验技术体系。实验主要包括动物免疫、骨髓瘤细胞和免疫脾细胞的制备、细胞融合、阳性杂交瘤的筛选、克隆培养、单克隆抗体的制备、纯化和鉴定。

根据Burnet的抗体选择理论，B淋巴细胞只能产生一种针对它的特异性表位抗体。克隆系产生的具有相同性质的同质抗体称为单克隆抗体，其分子结构和生物学特性完全相同，但B淋巴细胞的分泌对体外长期存活有重要影响。

采用细胞融合技术，将B淋巴细胞与体外长期增殖的骨髓瘤细胞进行融合。通过选择性培养获得的杂交瘤细胞称为杂交瘤细胞。这项工作不仅具有免疫B淋巴细胞分泌特异性单克隆抗体的功能，而且具有骨髓瘤细胞无限增殖的能力。杂交瘤细胞用于产生单克隆抗体。

肿瘤细胞中有两条DNA生物合成途径。首先是生物合成的主要途径，即从氨基酸和其他小分子化合物合成核苷酸，然后合成DNA。在核酸合成过程中，叶酸衍生物对核苷酸合成具有重要作用。氨基蝶呤是一种叶酸拮抗剂，可阻断细胞内DNA生物合成的主要途径。

此时，如果培养基中含有核苷酸合成的中间产物次黄嘌呤和胸腺嘧啶，则细胞的DNA合成可以通过另一种方式进行，即次黄嘌呤和胸腺嘧啶（HGPRT）和TK催化外源性次黄嘌呤和胸腺嘧啶合成核苷酸。如果没有这些酶，这条通路就会被阻断。

在HAT培养基中，a阻断了非融合骨髓瘤细胞及其同核融合体DNA合成的主要途径，由于缺乏HGPRT，培养基中的h不能使用。虽然TK可以使用t，但它不能完成完整的DNA合成过程。未融合的脾细胞及其同核融合体在培养基中不能长时间生长，约7天死亡。

脾细胞与骨髓瘤细胞（即杂交瘤细胞）的异核融合，不仅从脾细胞中获得HGPRT和TK，并利用h和t在培养基中合成DNA，而且从骨髓瘤细胞中获得无限增殖能力，使其能够在HAT培养基中存活。

单克隆抗体技术已成为免疫学中一项重要的常规技术，广泛应用于细胞生物学、遗传学、微生物学、生物化学、肿瘤学等生命科学领域。单克隆抗体引起的诊断革命不再局限于科学研究。它将在临床治疗学和其他经济领域产生越来越重要的影响。目前Beacon这款仪器具备了单细胞光导系统通过整合光电定位技术和微流控技术，实现了在芯片的纳升级小室中，基于单个细胞的高通量细胞生物学研究，对单细胞克隆技术这方面有着重大的意义。

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